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本發明公開了一種樹狀分子吉西他濱自組裝納米前藥及其制備方法及其應用，首先使用不同的疏水端或親水端合成末端疊氮修飾的兩親性樹狀分子，同時制備含炔鍵的吉西他濱前藥分子，前兩步的產物通過“疊氮?炔”點擊反應連接得到兩親性樹狀分子吉西他濱前藥，最后通過透析自組裝法制得納米前藥顆粒。對該納米粒的微觀結構及酶穩定性進行了研究，進一步通過細胞攝取和小鼠體內實驗，證實該自組裝納米前藥可明顯提高原型藥物吉西他濱的代謝穩定性及抗腫瘤活性，且能避免母體小分子藥物吉西他濱存在的毒副作用大等問題，可為臨床應用提供基礎實驗依據。

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