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本發明涉及一種腫瘤特異性基因表達盒、重組表達載體及構建方法和應用。包括依次連接的啟動子、目的基因、接頭、第一自殺基因、第二自殺基因和終止子；其中，所述目的基因為黑色素瘤分化相關基因7，所述接頭為P2A肽基因序列，所述第一自殺基因為單純皰疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因，所述第二自殺基因為胞嘧啶脫氨酶基因。本發明不僅聯合了具有極強抗腫瘤能力的mda?7及雙自殺融合基因TK?CD，增強了抗腫瘤活性，能有效識別腫瘤位點，而且通過P2A肽基因序列將其連接，使得到的腫瘤特異性基因表達盒或含有該腫瘤特異性基因表達盒的重組表達載體具有很高的轉錄活性，能夠高效地表達，為腫瘤的治療提供了新的途徑

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